Главная


Ниже сайты по теме автомобили автошкола запорожье.

Кожнореактивный фактор. Методика

Материалы и оборудование

Для работы нужны морские свинки обоих полов весом 200— 300 г, бесклеточный материал, содержащий КРФ, в качестве контроля БНФ культуры нестимулированных лимфоцитов с добавлением антигена, можно лектина, или инактивированная нагреванием (30 мин, 100°С), электрическая машинка для стрижки шерсти (использование химических депиляторов ввиду их раздражающего действия на кожу не рекомендуется), туберкулиновые шприцы с ценой делений 0,02 мл.

Выполнение эксперимента

За 24 часа до начала опыта волосы на спине морской свинки тщательно выстригают. Внутрикожно вводят 0,1—0,2 мл КРФ-содержащего материала. На одном животном можно поставить до 8 проб. Через 16—24 ч после инъекции проводят визуальную и (или) гистологическую оценку результатов.

Визуальная оценка

Через 20—30 мин после инъекции возникает участок наблюдения, через 6 часов начинает развиваться эритема с прогредиентным уплотнением, которые через 24 ч начинают претерпевать обратное развитие. Оценку проводят по следующим критериям.

1. Степень эритемы: субъективная оценка от 0 до 3,0 (отсутствие покраснения — темно-красная окраска кожных покровов).

2. Диаметр зоны эритемы (продольный, поперечный).

3. Степень уплотнения (субъективная оценка или измерение: толщины кожной складки).

Гистологическая оценка

Гистологически определяют протекающий в две фазы воспалительный процесс соединительной и жировой ткани. Он начинается приблизительно через 4 ч после инъекции с миграции лейкоцитов в область посткапиллярных венул, сопровождается рыхлой периваскулярной и интерстициальной инфильтрацией преимущественно нейтрофильными гранулоцитами. Через 6—8 ч наблюдается усиленное накопление моноцитов и макрофагов.

Периваскулярный инфильтрат, состоящий из макрофагов и лимфоцитов,
через 24 ч после внутрикожной инъекции КРФ человека (индуцированного ФГА). Окраска по Гимзе. х130

Периваскулярный инфильтрат, состоящий из макрофагов и лимфоцитов

Оценка изменений производится качественно после фиксирования и заключения объектов с последующей окраской по Гимзе. Полу количественную оценку можно произвести, вырезав место реакции, обработав ткань трипсином и подсчитав количество высвободившихся ядросодержащих клеток.

Источники ошибок

Существуют две основные причины ошибок.

1. Контаминация исследуемого материала посторонним раздражающим кожу материалом. Исключение путем точной биохимической характеристики инъецируемой пробы.

2. Ошибочное восприятие восстановительных процессов вокруг канала от иглы, за КРФ-обусловленное воспаление. Ошибку устраняют путем анализа нескольких срезов.

Наиболее точный критерий оценки — гистологический, поскольку эритема и уплотнения как сосудистые явления не обязательно могут быть связаны причинно-следственным отношением с КРФ Еще один способ устранения ошибок заключается в одновременном введении под кожу или внутривенно 0,5 М раствора L-фукозы. Поскольку КРФ-индуцированная реакция будет тормозиться за счет конкуренции за рецепторы, содержащие L-фукозу, станет возможной дифференциальная диагностика неспецифических раздражений кожи, например, реакции Артюса.